Voges-Proskauer experiment over bacteriën om hun vermogen om glucose te gebruiken te vinden (met figuur)

Lees dit artikel om meer te weten te komen over de Voges-Proskauer-test (VP-test) op bacteriën om te zien in hoeverre ze glucose kunnen gebruiken bij de productie van acetylmethylcarbinol!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om glucose te gebruiken en om te zetten in acetylmethylcarbinol (acetoïne), wat een neutraal eindproduct is.

Deze bacteriën metaboliseren in het begin glucose tot pyrodruivenzuur, dat verder wordt gemetaboliseerd door het metabole intermediaire azijnzuur tot acetylmethylcarbinol (acetoïne) en C02 via de 'butyleenglycolroute'.

Acetylmethylcarbinol wordt geoxideerd tot diacetyl in aanwezigheid van a-naftol onder basische omstandigheden (40% KOH). Diacetyl reageert met de guanidinegroep van creatine (van pepton dat in het kweekmedium wordt gebruikt) voor het produceren van een rose-roze kleur.

In de Voges-Proskauer-test (VP-test) worden de testbacteriën gekweekt in een bouillonmedium dat glucose bevat. Als de bacteriën het vermogen hebben om glucose te gebruiken met de productie van acetylmethylcarbinol (acetoïne) als het neutrale eindproduct, verkrijgt de bouillon een rozerode kleur na toevoeging van a-naftoloplossing gevolgd door 40% KOH.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, MR-VP-bouillon (of glucosefosfaatbouillon), VP-oplossing I (Barritt's reagensoplossing A) en VP-oplossing II (Barritt's reagensoplossing B), geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. De ingrediënten van MR-VP-medium (met glucose als hoofdbestanddeel) of het kant-en-klare poeder dat voor 100 ml bouillon is vereist, worden gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en wervelend (figuur 7.5). De bouillon die wordt gebruikt voor de methylrode test kan hier ook worden gebruikt. Gewoonlijk wordt dezelfde bouillon tegelijkertijd voor zowel de tests (MR en VP) gebruikt.

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 6, 9 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als het minder is. De kolf wordt, indien nodig, verwarmd om de ingrediënten volledig op te lossen.

3. De bouillon wordt verdeeld in vijf reageerbuizen (elk ongeveer 10 ml), met katoen bedekt, bedekt met ambachtelijk papier en met draad of rubberen band gebonden.

4. De bouillonbuizen worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) in een autoclaaf gesteriliseerd.

5. De bouillonbuizen mogen afkoelen tot kamertemperatuur.

6. De testbacteriën worden aseptisch, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, in de bouillon geïnoculeerd met behulp van een entcuvus die is gesteriliseerd over bunsenvlam. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

7. De geënte bouillonbuizen worden bij 37 ° C gedurende 48 tot 72 uur in een incubator geïncubeerd.

8. VP-oplossing I (die a-naftol bevat) wordt in de kweekbuizen (telkens 0, 2 ml) gedruppeld en grondig gemengd.

9. VP-oplossing II (die KOH bevat) wordt in de kweekbuizen (elk 0, 6 ml) laten vallen, grondig gemengd en gedurende 30 minuten tot 2 uur laten staan.