Voorbereiding van de natte bacteriënmassa op het waarnemen van de natuurlijke vorm en grootte

Streef ernaar een natte berging van een bacterie voor te bereiden, voor het observeren van de natuurlijke vorm, grootte en opstelling in levende toestand.

Doel:

Bacteriecellen kunnen gemakkelijk en duidelijk worden gezien, gekleurd door vlekken, maar in de meeste kleuringsprocessen sterven de cellen af en verliezen hun natuurlijke vorm en grootte door warmte-fixatie en door blootstelling aan chemicaliën (vlekken, zuur en alcohol).

Het doel van dit experiment is om de natuurlijke vorm, grootte en rangschikking van bacteriën in levende toestand te observeren. Motiliteit kan niet worden waargenomen bij natte montage, aangezien de cellen tussen de schuif en de dekglaasje worden gedrukt.

Beginsel:

Bij natte montage wordt een druppel van de bacteriesuspensie op een objectglaasje geplaatst, bedekt met een dekglaasje en waargenomen onder een samengestelde microscoop of bij voorkeur onder een donkerveld- of fase-contrastmicroscoop met behulp van olie-immersieobjectief.

Vereiste materialen:

Glasplaatje, dekglaasje, vaseline, onderdompelingsolie (cederwalsolie of vloeibare paraffine), bacteriekweek (op vaste medium of in vloeibare suspensie), lus en microscoop (verbinding, donkerveld of fasecontrast).

Procedure:

1. Een dia wordt op de juiste manier gereinigd onder leidingwater, zodat water niet als druppels op het oppervlak achterblijft (Figuur 5.2).

2. De dia wordt gedroogd door met absorberend papier af te vegen en vervolgens over vlammen te bewegen of in de zon te blijven.

3. Als de bacteriën zijn gekweekt op een vast medium (zoals een schuine kweek of plaatcultuur), wordt een druppel gedestilleerd water in het midden van de schuif geplaatst. Een lus wordt gesteriliseerd door deze over een vlam tot roodgloeiend te verwarmen. Het wordt tot kamertemperatuur gekoeld. Vervolgens wordt aseptisch een klein deel van de bacteriekweek afgeschraapt door de lus en overgebracht naar de druppel water.

Een suspensie van bacteriën wordt gemaakt door de lus van bacteriën in de waterdruppel voorzichtig te mengen, op een manier dat de druppel zich niet verspreidt. Indien aseptisch gegroeid in een vloeibaar medium als suspensie, wordt een druppel van de bacteriesuspensie direct in het midden van de schuif geplaatst met behulp van een vlamgesteriliseerde lus.

4. Vaseline of soortgelijk materiaal wordt aangebracht rond de druppel, zodat wanneer de dekglaasje de druppel afdekt de verdamping en het effect van luchtstroom wordt geminimaliseerd.

5. Een dekglaasje wordt in een schuine positie gehouden nabij de druppel bacteriesuspensie waarbij één rand de glijbaan aanraakt.

6. Langzaam daalt de dekglaasje totdat deze het oppervlak van de druppel raakt.

7. Vervolgens wordt de dekglaasje vrijgegeven, zodat de druppel bacteriesuspensie zich in alle richtingen onder de dekglaasje verspreidt. Er moet voor worden gezorgd dat er geen luchtbellen in de suspensie worden gevormd.

8. De dia wordt op het podium van een samengestelde microscoop geknipt en waargenomen met behulp van energiebesparende en hoge droge doelen. Vervolgens wordt een druppel onderdompelingsolie op de dekglaasje geplaatst en waargenomen met behulp van het olie-immersieobjectief van de microscoop. Bij voorkeur moet een fasecontrast- of donkerveldmicroscoop worden gebruikt voor duidelijke waarneming.