Oxidase-test op bacteriën om hun vermogen te vinden om gelatine te hydrolyseren door gelatinase te produceren

Oxidase-test op bacteriën om hun vermogen te vinden om gelatine te hydrolyseren door gelatinase te produceren!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om gelatine te hydrolyseren, omdat ze het proteolytische enzym 'gelatinase' kunnen produceren.

Terwijl de gelatine wordt geprecipiteerd door middel van kwikchloride-producerende translucentie, worden de gehydrolyseerde eindproducten niet geprecipiteerd door mercurichloride, waarvoor ze geen dergelijke doorschijnendheid produceren, maar eerder transparantie produceren.

In de gelatiniseerproef worden de testbacteriën gekweekt op agarplaten die gelatine bevatten. Nadat de kolonies van de bacteriën zichtbaar zijn, worden de platen overstroomd met een oplossing van kwikchloride. Als de bacteriën het vermogen hebben om gelatine te hydrolyseren, hydrolyseren haar kolonies de gelatine in het medium in de gebieden die hen omringen, terwijl de rest van de gebieden van de platen niet-gehydrolyseerd gelatine bevatten.

Dientengevolge, wanneer overstroomd met een oplossing van mercurichloride, worden transparante heldere zones rond de koloniën gevormd, omdat de gehydrolyseerde producten die eromheen worden gevormd geen precipitaten vormen met het mercurichloride. Aan de andere kant worden de rest van de gebieden van de platen doorschijnend, omdat de niet-gehydrolyseerde gelatine in deze gebieden precipitaten vormen met mercurichloride.

Vereiste materialen:

Petrischalen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, gelatine-agar van Fraizer, oplossing van kwikchloride, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. Twee petrischalen worden gereinigd, afgedekt met handgeschept papier en met draad of rubberen band vastgemaakt (Figuur 7.20). Deze stap evenals de sterilisatie van de petrischalen bij stap 6 zijn weggelaten, als ovengesteriliseerde petrischalen direct worden gebruikt

2. De ingrediënten van het gelatine-agarmedium van Fraizer (met als hoofdcomponent gelatine) of het kant-en-klare poeder dat voor 100 ml medium nodig is, worden gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en wervelen. .

3. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 2 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is.

4. De kolf wordt verwarmd om de agar volledig in het medium op te lossen.

5. De fles is van katoenstof voorzien, bedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band vastgemaakt.

6. De twee petrischalen en de erlenmeyer bevattende Fraizer's gelatine agarmedium worden 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) gesteriliseerd in een autoclaaf.

7. Na sterilisatie worden ze uit de autoclaaf verwijderd en laten ze enige tijd afkoelen zonder het medium te laten stollen. Koeling van het medium voorkomt condensatie en ophoping van waterdruppeltjes in de platen. Als het medium al tijdens opslag is bereid en gestold, moet het vloeibaar worden gemaakt door het voorzichtig te verhitten totdat het volledig is gesmolten.

8. Om gelatine-agarplaten te bereiden, voordat het gestagenerde Frazier-gelatine-agarmedium afkoelt en stolt, wordt het in warme gesmolten toestand aseptisch gegoten, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, in de twee gesteriliseerde petrischalen (elk ongeveer 20 ml), dus dat het gesmolten medium de bodem van de petrischalen volledig bedekt.

Vervolgens worden de platen bedekt met hun deksels en men laat ze afkoelen om het medium daarin te laten stollen. Waterdamp die kan condense- ren op het binnenoppervlak van de platen en deksels wordt verdampt door de platen en deksels ongeveer een uur in een incubator bij 37 ° C in omgekeerde positie te houden.

9. Elke plaat is aan de onderkant gemarkeerd in vier kwartieren.

10. "Vlek inoculatie" van de testbacteriën wordt aseptisch gedaan, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in het midden van elk kwart door een vlek (of klein uitstrijkje) van de bacteriën te maken met behulp van een vlamgesteriliseerde lus. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

11. De geënte platen worden geïncubeerd in omgekeerde positie, van bovenaf, bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur in een incubator totdat kolonies van de bacteriën zichtbaar zijn.

12. De platen worden overstroomd met een oplossing van kwikchloride (HgCl2).