Citraatgebruikstest om het vermogen van bacteriën te testen om citraat als de bron van koolstof te gebruiken

Probeer de citraatgebruiktest uit te voeren om te achterhalen of een bacterie citraat als enige bron van koolstof kan gebruiken.

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om in media te groeien zonder organische C en N.

Ze kunnen natriumcitraat als enige bron van C en ammoniumdiwaterstoffosfaat (NH ₄ H2 P0 ₄ ) als enige bron van N gebruiken. Ze gebruiken NH ₄ H2 P0 ₄ om N te krijgen met de productie van NH ₃, wat de pH resulterend in een verandering in de kleur van broomthymolblauw van groen (pH = 6, 9) in blauw (pH boven 7, 6).

In de citraatgebruikstest worden de testbacteriën gekweekt op agar-hellingen die geen organische C of N bevatten, die eerder natriumcitraat, NH4H2P04 en broomthymolblauw bevatten. Als de bacteriën het vermogen hebben om citraat als de enige bron van C te gebruiken, vertoont het groei op de hellingen. Het maakt ook gebruik van NH ₄ H ₂ P0 ₄ als de enige bron van N, wat resulteert in een verandering in de kleur van de hellingen van groen naar blauw.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstaafjes, inentingsnaald, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, Simmons citraat-agar, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. De ingrediënten van Simmons citraat-agarmedium (bevattende natriumcitraat, NH4H, P0 ₄ en broomthymolblauw als hoofdingrediënten) of het kant-en-klare poeder dat vereist is voor 100 ml van het medium wordt gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en zwenken (figuur 7.6).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 6, 9 met 0, 1 N HC1 als het meer is of met 0, 1 N NaOH als het minder is.

3. De kolf wordt verwarmd om de agar volledig in het medium op te lossen.

4. Voordat het stolt, wordt het medium in warme gesmolten toestand verdeeld in 5 reageerbuizen (elk ongeveer 20 ml).

5. De reageerbuisjes zijn van katoenstof voorzien, afgedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band verbonden.

6. Ze worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) gesteriliseerd in een autoclaaf.

7. Na sterilisatie worden ze uit de autoclaaf verwijderd en in een schuine positie gehouden om het medium af te koelen en te stollen, om citraat-agar-scheef te krijgen.

8. De testbacteriën worden aseptisch geënt, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, in de hellingen door steken in de kolf en strepen op het oppervlak van de hellingen met behulp van een met vlam gesteriliseerde naald. De naald wordt na elke inoculatie gesteriliseerd.

9. De geënte hellingen worden gedurende 24 tot 48 uur in een incubator bij 37 ° C geïncubeerd.