Koolhydraatfermentatietest op bacteriën om hun vermogen tot fermentatie van koolhydraten te achterhalen

Koolhydraatgistingstest op bacteriën om hun vermogen tot fermentatie van koolhydraten te achterhalen!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om koolhydraten te fermenteren, met name suikers. Onder hen kan elke bacterie slechts enkele van de suikers vergisten, terwijl het de andere niet kan gisten.

Dus, de suikers, die een bacterie kan gisten en de suikers, die het niet kan is het kenmerk van de bacterie.

De koolhydraatfermentatietest wordt uitgevoerd om, afzonderlijk, het vermogen van bacteriën om de suikers zoals glucose, sucrose, lactose, maltose en xylose, evenals hun alcoholische derivaten zoals aesculine, salicine, adonitol, dulcitol en sorbitol, te fermenteren. Als de bacteriën een suiker- of suikerderivaat kunnen fermenteren, wordt er zuur geproduceerd, waardoor de pH de kleur van broomcresolpaars verandert van paars naar geel.

Bovendien, als het een 'aerogene bacterie' is, worden zowel zuur als gas (CO ₂ ) geproduceerd, terwijl als het anaërobe bacteriën zijn ', alleen zuur wordt geproduceerd zonder gas. De productie van gas wordt aangegeven door zijn accumulatie als een bel in een omgekeerde Durham-buis (een miniatuur-reageerbuis).

Bij de koolhydraatfermentatietest worden de testbacteriën gekweekt in een medium in bouillon dat een van de suikers of suikerderivaten en broomcresolpaars bevat. Een omgekeerde Durham-buis wordt erin ondergedompeld gehouden.

Als de bacterie "het vermogen heeft om de suiker of het suikerderivaat te fermenteren, verandert de kleur van de bouillon van paars naar geel. Als gasaccumulatie wordt gezien als een luchtbel in de Durham-buis, is dit een acrogene bacterie, terwijl als er geen gasophoping wordt waargenomen, dit een anaerogene bacterie is.

Vereiste materialen:

Reageerbuisjes, Durham-buisjes, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, opvangpot, couveuse, koolhydraatbouillon (bouillon met de specifieke suiker of suikerderivaten zoals glucose, sucrose, lactose, maltose, xylose aesculine, salicine, adonitol, dulcitol, sorbitol enz.), geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. De ingrediënten van koolhydraatbouillonmedium (die het vereiste koolhydraat en broomresolpurijn als de hoofdcomponenten bevat) of het kant-en-klaar poeder dat voor 100 ml van de bouillon vereist is, worden afgewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml. door te schudden en te draaien (figuur 7.8).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 6, 8 met 0, 1 N HC1 als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is. De kolf wordt, indien nodig, verwarmd om de ingrediënten volledig op te lossen.

3. De bouillon wordt verdeeld in vijf reageerbuisjes (elk ongeveer 10 ml).

4. Eén Durham-buis wordt in omgekeerde toestand in elke reageerbuis in de bouillon gebracht. De Durham-buizen bevatten lucht erin en zweven. Tijdens de sterilisatie verdringt hete stoom deze lucht, waardoor ze in de bouillon onderdompelen. Het is dus niet nodig om lucht uit de Durham-buisjes te verwijderen door ze voor het steriliseren met de bouillon te vullen om ze ondergedompeld te houden in de bouillon.

5. De reageerbuisjes zijn van katoenstof voorzien, afgedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band verbonden.

6. De bouillonbuizen worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) gesteriliseerd in een autoclaaf. Als alternatief wordt 90 ml van het basale medium (medium zonder het koolhydraat) in de autoclaaf gesteriliseerd en hieraan wordt na afkoeling 10 ml van de koolhydraatoplossing (10%) gesteriliseerd door membraanfiltratie toegevoegd. Dit is met name van belang voor warmtegevoelige koolhydraten, die afbraak ondergaan tijdens warmtesterilisatie.

7. De bouillonbuizen mogen afkoelen tot kamertemperatuur.

8. De testbacteriën worden aseptisch geïnoculeerd, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in de bouillon met behulp van een entcuvus die is gesteriliseerd over bunsenvlam. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

9. De geïnoculeerde bouillonbuizen worden 24 uur geïncubeerd bij 37 ° C in een incubator.