3 classificaties van agglutinatietechnieken

Drie typen waarin de agglutinatietechnieken van cellen zijn ingedeeld zijn: 1. directe agglutinatie, 2. indirecte (passieve) agglutinatie en 3. omgekeerde (passieve) agglutinatie.

1. Directe agglutinatietest:

Cellen (zoals bacteriën, schimmels en erythrocyten) en onoplosbare deeltjesvormige antigenen kunnen direct worden geagglutineerd door hun specifieke antilichamen. Het antilichaam heeft twee Fab-armen waarmee het op twee cellen aan antigenen kan binden. Op dezelfde manier binden veel antilichaammoleculen zich met een aantal cellen om een ​​rooster te vormen.

Deze roostervorming wordt visueel gezien als klonten. Vandaar dat de vorming van klonten wijst op de aanwezigheid van antigeen-antilichaambinding. Gebrek aan agglutinatie geeft de afwezigheid van antigeen-antilichaamreactie aan.

Gebruik van directe agglutinatietest:

een. Identificatie van microben:

De bacteriekolonies gekweekt in kweekmedia worden geïdentificeerd door gebruik te maken van bekende antisera tegen microben. Het antimicrobiële antiserum dat een zichtbare agglutinatie produceert, identificeert de bacteriën.

b. Diagnose van microbiële infecties door detectie van de aanwezigheid van antistoffen tegen microben in het serum. Bekende microbiële antigenen worden gemengd met het serum van de patiënt en het optreden van agglutinatie geeft de aanwezigheid van serumantilichamen tegen de microbe aan.

c. ABO-bloedgroepering van menselijke erytrocyten (door antisera te gebruiken).

De agglutinatieproeven worden uitgevoerd op het glaasje (diaagglutinatietest) of in buizen (buisagglutinatietest).

ik. De agglutinatietest van dia's is eenvoudig en gemakkelijk uit te voeren en er zijn slechts enkele minuten nodig om de test uit te voeren.

ii. Buisagglutinatietest wordt gebruikt om de hoeveelheid serumantilichamen tegen een microbe te kwantificeren door serieel het serum te verdunnen en vervolgens de verdunde sera te mengen met een constante hoeveelheid microbiële antigenen. Na een geschikte incubatie wordt de hoogste verdunning van het serum die zichtbare agglutinatie vertoont, als de titer van het serum genomen (bijvoorbeeld Widal-tubetest, Brucella-tubetest). De titer weerspiegelt de concentratie van antilichamen in het serum; hoger de titer, meer is de concentratie van antilichamen.

De glaasjes testen om serum-antilichamen tegen infectieuze agentia te detecteren worden gebruikt als initiële screeningstests. De sera van de positieve glaasjesproeven moeten opnieuw worden getest met behulp van buistests om de resultaten van de diatest te bevestigen. De sledetest kan misleidende resultaten geven, vooral bij zeer hoge serumantistofspiegels (bijv. Prozoneverschijnsel met brucella-antilichamen).

Er is veel intrinsieke variabiliteit in de agglutinatietestsystemen. Vandaar dat, wanneer de serumtiterwaarden van een patiënt twee keer worden gecontroleerd, het verschil tussen de titerwaarden significant is, alleen wanneer de titerwaarden verschillen met ten minste twee dubbele verdunningen [of verschil door twee buizen (vier keer de eerste waarde) ] (bijv. Bij de Widal-tubetest wordt het serum verdund in twee vouwen: 1 op 20, 1 op 40, 1 in 80, 1 op 160, 1 op 320 en 1 op 640. Als een patiënt een eerste Widal-test heeft titer van 1 op 160, de tweede Widal-testtiter is significant als deze 1 op 640 of meer dan 1 op 640 is.)

Heterofiele antilichaamtest:

(Vaak aangeduid als mono-spot test) Heterofiele antilichaamtest is een hemagglutinatietest voor de detectie van antilichamen tegen het Epstein Barr (EB) -virus die infectieuze mononucleosisziekte veroorzaken. De IgM-antilichamen die worden gevormd tijdens infectieuze mononucleosis kruisreageren met equine RBC-oppervlakte-antigenen (waarschijnlijk als gevolg van antigene overeenkomst tussen EB-virus en RBC-oppervlakte-eiwitten van paardachtigen) en veroorzaken hemaglutinatie.

Indirecte (passieve) agglutinatietest:

In de indirecte agglutinatietest worden bekende oplosbare antigenen gecoat op andere cellen (bijvoorbeeld schapen- of kalkoenerytrocyten) of inerte deeltjes (bijv. Latex, bentoniet, houtskool, polystyreen), die werken als passieve dragers van antigenen.

Veel antigenen kunnen direct op erythrocyten worden gecoat of na behandeling van de erythrocyten met formaline, looizuur of glutaar. De voordelen van het gebruik van erytrocyten voor coating zijn hun gemakkelijke beschikbaarheid en opslagcapaciteit. Bovendien zijn deze tests zeer gevoelig.

Het testserum wordt gemengd met bekende met antigeen beklede erythrocyten of latex.

↓

Als het testserum antilichamen heeft, aggluteren de erythrocyten of latexdeeltjes en produceren ze zichtbare klonten.

Hemagglutinatie assay:

Hemagglutinatietests zijn eenvoudig en gemakkelijk uit te voeren. Zowel kwalitatieve als kwantitatieve testen kunnen worden uitgevoerd met de hemagglutinatietechniek.

Het testserum wordt serieel verdund in een oplossing van een verdunningsmiddel in een putjes van een microtiterplaat.

↓

RBC's bekleed met een bekend antigeen worden toegevoegd in gelijke volumes aan alle putjes. Geschikte positieve controle, negatieve controle en reagenscontroles worden gebruikt. De plaat wordt goed geschud en geïncubeerd op een plaats vrij van trillingen.

↓

Na de incubatie wordt de plaat met het blote oog gelezen voor agglutinatie.

Positieve reactie:

Putjes met agglutinatie duiden op de binding van met antigeen beklede RBC's met overeenkomstige antilichamen in het testserum. De bodem van de geagglutineerde put is beschreven om een ​​tapijtuiterlijk te hebben.

Negatieve reactie:

In putjes waar geen antigeen-antilichaambinding is, vindt agglutinatie van RBC's niet plaats. Vanwege de zwaartekracht zakken de RBC's naar de bodem van de wells en geven ze een "knop" -achtige uitstraling, waarbij de rand van de "knop" scherp en regelmatig is.

Titer van het testserum, antilichaam

De serumverdunning die 50 procent agglutinatie geeft in vergelijking met de put die volledige (100 procent) agglutinatie vertoont, is de antilichaamtiter van het testserum. Hemagglutinatiesets zijn beschikbaar voor antilichaamdetectie tegen Hepatitis B-virus, HIV, thyroglobuline, enz.

Gelatine-deeltjesagglutinatie:

Gelatinedeeltjes zijn een alternatief voor erythrocyten voor de deeltjesagglutinatietests. Speciale gelatine deeltjes (ongeveer 3 μm diameter) hebben een zeer hydrofiel oppervlak en daarom is er geen niet-specifieke binding van materialen aanwezig in het monster. Gelatinedeeltjes worden gemaakt door fasescheiding en driedimensionale verknoping bij 40 ° C. De resulterende deeltjes worden gefixeerd met formaldehyde of glutaaraldehyde.

Gelatinedeeltjes hebben geen antigeniciteit en daarom zijn ze vrij van de problemen die gepaard gaan met hemaglutinatiebepalingen (zoals de heterofiele antilichamen, die niet-specifiek kunnen reageren met rode bloedcellen en vals-positieve agglutinaties geven in hemagglutinatie-assays).

Latexagglutinatietest:

Behalve erythrocyten en gelatine kunnen weinig andere deeltjes ook worden gebruikt om antigenen op hun oppervlak te dragen. Dergelijke met antigeen beklede deeltjes zullen agglutineren wanneer ze met specifieke antilichamen worden gemengd. Eiwit- en polysaccharide-antigenen kunnen worden gecoat op latexdeeltjes. Deze met antigeen beklede deeltjes zullen agglutineren in aanwezigheid van antilichamen.

Passieve hemagglutinatie-assay omgekeerd:

In omgekeerde passieve hemagglutinatie-assays zijn de RBC's bekleed met bekende antilichamen. Deze kits worden gebruikt om de antigenen in de testmonsters te detecteren, zoals HB _s Ag in het serum.

Rose-Waaller-test:

Dit is een passieve hemagglutinatietest om reumafactor op te sporen. Een van de kenmerken van humane reumafactor is dat het zowel kan binden aan menselijk IgG als konijnen-IgG. Schapenerytrocyten zijn bekleed met subagglutinerende hoeveelheden antilichamen tegen schaap-IgG (opgehoogd bij konijnen). De reumatoïde factoren agglutineren schapenerytrocyten gecoat met konijn-anti-schapen IgG.

Uitvlokkingstest:

Flocculatie is een ander type van antigeen-antilichaamcomplexvormingstest, gebruikt om de antilichamen te detecteren en kwantificeren. In tegenstelling tot agglutinatie en precipitatie (waarbij de antigeen-antilichaamcomplexen bezinken tot aan de bodem van de buis) aggregeren de antigeen-antilichaamcomplexen in flocculatietest en blijven ze in suspensie als vlokken en worden de resultaten onder een microscoop afgelezen. Deze techniek wordt gebruikt in de VDRL-test (venerische ziekte-laboratoriumonderzoek) om antilichamen tegen Treponema pallidum te detecteren, de bacteriën die syfilis veroorzaken.

Virale hemagglutinatie:

Virale hemagglutinatie is een speciale categorie van erytrocytenagglutinatie, waarbij geen antigeen-antilichaamreactie is betrokken. Bepaalde virussen binden aan de oppervlakte-eiwitten van RBC's en deze binding leidt tot spontane agglutinatie van RBC's.

De spontane agglutinatie van RBC's door een virus kan worden voorkomen door specifieke antivirale antilichamen. De antilichamen tegen het virus binden aan de virale oppervlakte-antigenen en voorkomen de interactie van virus en RBC's, en bijgevolg zijn de RBC's niet geagglutineerd. Het wordt de virale hemagglutinatieremmingstest genoemd en wordt gebruikt om virale antilichamen in het serum van patiënten te kwantificeren.

Test voor koude agglutininen:

Antilichamen gevormd tijdens bepaalde infecties (vooral Mycoplasma pneumoniae) en auto-immuunziekten hebben een specifiek vermogen om RBC's te agglutineren bij 4 ° C. Deze antilichamen worden koude agglutininen genoemd.

Seriële verdunningen van serum van de patiënt worden gedurende de nacht geïncubeerd met 1% RBC's bij 4 ° C.

↓

De buizen worden onderzocht op de aanwezigheid van agglutinatie. Als agglutinatie aanwezig is, worden de buisjes opnieuw geïncubeerd bij 37 ° C.

↓

Deagglutinatie van RBC's bij 37 ° C geeft aan dat het serum koude agglutinines heeft. Een koude agglutininetest wordt gebruikt om de Mycoplasma pneumoniae-infectie te diagnosticeren. 50 tot 80 procent van de patiënten met acute Mycoplasma pneumoniae-infectie heeft koud agglutinine dat behoort tot het IgM-type.