Zetmeelhydrolyse Test op bacteriën om hun vermogen om zetmeel te hydroliseren te achterhalen

Zetmeelhydrolyse Test op bacteriën om hun vermogen om zetmeel te hydroliseren te achterhalen!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om zetmeel te hydrolyseren, omdat ze het saccharolytische enzym kunnen produceren.

Terwijl het zetmeel een donkerblauwe kleur met jood vormt, krijgen de gehydrolyseerde eindproducten niet een dergelijke donkerblauwe kleur met jood.

Bij de zetmeelhydrolyseproef worden de testbacteriën gekweekt op agarplaten die zetmeel bevatten. Nadat kolonies van de bacteriën zichtbaar zijn, worden de platen overstroomd met jodiumoplossing. Als de bacteriën het vermogen hebben om zetmeel te hydrolyseren, hydrateren de kolonies het zetmeel in het medium in de gebieden die hen omringen, terwijl de rest van de gebieden van de platen niet-gehydrolyseerd zetmeel bevatten.

Dientengevolge, wanneer overstroomd met jodiumoplossing, worden transparante heldere zones rond de kolonies gevormd, omdat de gehydrolyseerde producten die daaromheen worden gevormd geen donkerblauwe kleur met jodium vormen. Aan de andere kant worden de rest van de gebieden van de platen donkerblauw, aangezien jodium een donkerblauwe kleur vormt met het niet-gehydrolyseerde zetmeel in deze gebieden.

Vereiste materialen:

Petrischalen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, zetmeelagar, Lugol's jodiumoplossing, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. Twee petrischalen worden gereinigd, afgedekt met handgeschept papier en met draad of rubberen band vastgemaakt (Figuur 7.21). Deze stap evenals de sterilisatie van de petrischalen bij stap 6 is weggelaten, indien ovengesteriliseerde petrischalen direct worden gebruikt.

2. De ingrediënten van zetmeelagar-medium (die zetmeel als hoofdcomponent bevatten) of het kant-en-klaar poeder ervan dat voor 100 ml medium nodig is, worden gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en wervelen.

3. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 2 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is.

4. De kolf wordt verwarmd om de agar volledig in het medium op te lossen.

5. De fles is van katoenstof voorzien, bedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band vastgemaakt.

6. De twee petrischalen en de erlenmeyer bevattende zetmeel agarmedium worden 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) gesteriliseerd in een autoclaaf.

7. Na sterilisatie worden ze uit de autoclaaf verwijderd en kunnen ze enige tijd afkoelen zonder het medium te laten stollen. Koeling van het medium voorkomt condensatie en ophoping van waterdruppeltjes in de platen. Als het medium al tijdens opslag is bereid en gestold, moet het vloeibaar worden gemaakt door het voorzichtig te verhitten totdat het volledig is gesmolten.

8. Om zetmeelagarplaten te bereiden, voordat het gesteriliseerde zetmeelagarmedium afkoelt en stolt, wordt het in warme gesmolten toestand aseptisch gegoten, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, in de twee gesteriliseerde petrischalen (elk ongeveer 20 ml), zodat het gesmolten medium bedekt de bodem van de petrischalen volledig.

Vervolgens worden de platen bedekt door hun deksels en men laat ze afkoelen om het medium daarin te laten stollen. Waterdamp die kan condenseren op het binnenoppervlak van de platen en deksels wordt verdampt door de platen en de deksels in een omgekeerde positie te houden in een incubator bij 37 ° C gedurende ongeveer 1 uur.

9. Elke plaat is aan de onderkant gemarkeerd in vier kwartieren.

10. "Vlek inoculatie" van de testbacteriën wordt aseptisch gedaan, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in het midden van elk kwart door een vlek (of klein uitstrijkje) van de bacteriën te maken met behulp van een vlamgesteriliseerde lus. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

11. De geënte platen worden geïncubeerd in omgekeerde positie, van bovenaf, bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur in een incubator totdat kolonies van de bacteriën zichtbaar zijn.

12. De platen worden overspoeld met de jodiumoplossing van Lugol.