Plant Tissue Culture (een overzicht)

Cultuur is een term die over het algemeen wordt gebruikt voor kunstmatige groei. De plantenweefselcultuur verwijst in feite naar groei van plantencellen, weefsel en orgaan op kunstmatige voedingsmedia. Weefselkweek is een experimentele techniek waarbij een massa cellen (callus) wordt geproduceerd uit weefsel van explantaten. De callus geproduceerd door dit proces kan direct worden gebruikt voor het regenereren van plantjes of voor het extraheren of manipuleren van enkele primaire en secundaire metabolieten.

Vereisten voor weefselkweeklaboratorium:

1. Was- en opslagfaciliteiten.

2. Mediavoorbereiding en opslagruimte.

3. Overdrachtsgebied voor aseptische manipulaties.

4. Cultuurlokaal of entstof voor onderhoud van culturen onder gecontroleerde omstandigheden van temperatuur, licht en vochtigheid.

5. Observatie- of gegevensverzamelingsgebied.

1. Was- en opslagfaciliteiten:

een. Glaswerk schoonmaken:

Het glaswerk wordt 16 uur in een detergensoplossing gedrenkt, daarna eerst in leidingwater gespoeld, gevolgd door een tweede spoeling in gedestilleerd water.

Als het wassen mechanisch wordt uitgevoerd, in een vaatwasser, wordt de glazen mat gedurende 5-10 minuten met een reinigingsmiddel bij 70 ° C behandeld. verdere reiniging omvat een spoeling van 5 minuten in warm water, 3 minuten spoelen in gedeïoniseerd water en een laatste handspoeling in gedistilleerd water.

b. Plastic labware:

(i) Een voorveresterde polystyreenkweekcontainer voor eenmalig gebruik (falcon, corning) is beschikbaar en wordt gebruikt in plaats van glaswerk om af te wassen.

(ii) Kunststofproducten kunnen met een mild niet-schurend reinigingsmiddel worden gewassen en worden gespoeld met leidingwater en gedestilleerd water.

2. Mediavoorbereidingsruimte:

De ruimte voor de voorbereiding van de media moet gescheiden zijn van het werklaboratorium. Dit gebied moet worden gebruikt voor de bereiding van kweekmedia. De kamer moet worden uitgerust met

1. Glaswerk

2. Cultuurschepen.

3. pH-meter

4. Kookplaten.

5. Saldo.

6. Waterbad

7. Bunsenbrander.

8. Magnetron.

9. Autoclaveren.

10. Koelkast.

3. Overdracht gebied:

(a) Plastic doos. Dit kan worden gesteriliseerd met een Ultraviolet (UV) -licht en door het vloeroppervlak schoon te vegen met 95% ethylalcohol

(b) Houten kap.

(c) Laminaire luchtstroomkast. Een kleine motor blaast eerst lucht in de unit via een grof filter, waar grote stofdeeltjes worden afgescheiden en vervolgens door een 0, 3 pm HEPA-filter worden gevoerd. De lucht wordt naar beneden gericht (verticale stroomeenheid) of naar buiten gericht (horizontale stroomeenheid) over het werkoppervlak.

De lucht die uit het fijne filter komt, is ultrazuiver (vrij van schimmel- of bacteriële verontreinigingen) en de snelheid (27 ± 3 m / min) verhindert adequaat de microverontreiniging van het werkgebied door te werken voor de kast.

4. Cultuurruimte:

Alle soorten plantenweefsels worden geïncubeerd onder omstandigheden van goed geregelde temperatuur, vochtigheid, verlichting en luchtcirculatie.

De kweekruimte moet zowel licht als temperatuur gedurende 24 uur kunnen programmeren. Airconditioners en verwarming worden gebruikt om de temperatuur rond 25 ± 2 ° C te houden.

De verlichting wordt aangepast in termen van hoeveelheid en fotoperiodieduur door automatische klokken te gebruiken. Culturen worden gekweekt in diffuus licht, hoewel er ook voorzieningen moeten worden getroffen voor het handhaven van kweken in hogere lichtintensiteit evenals totale duisternis. Het vochtigheidsbereik van 20 - 98%, controleerbaar tot ± 3% en uniforme geforceerde luchtventilatie.

Speciaal ontworpen rekken van glas, hard gaas of hout worden in de kweekruimte voor rotculturen geleverd. Elke plank verlicht door een afzonderlijke set TL-buizen.

De kweekvaten (kolf, potten en petrischalen) kunnen direct op de plank of trays van geschikte grootte worden geplaatst, terwijl kweekbuizen metalen rekken nodig hebben om ze vast te houden.

Kenmerken van incubatoren en groeikamers:

1. Temperatuurbereik 2-40 ° C.

2. Temperatuurregeling, ± 0, 5 ° C.

3. Veiligheid hoge en lage temperatuur limieten.

4. Continue temperatuur recorder.

5. 24 uur. temperatuur en licht programmeren.

6. Instelbaar fluorescerend licht tot 10.000 lux.

7. Relatieve vochtigheidsbereik 20-98%.

8. Relatieve vochtigheidsregeling, ± 3%.

9. Uniforme verdeling van de perslucht.

10. Capaciteit tot 0, 7 m ³ met schapruimte van 0, 5 m ²

6. Gegevensverzamelingsgebied:

De groei en ontwikkeling van weefsels die in vitro worden gekweekt, worden over het algemeen gevolgd door het observeren van kweken met regelmatige tussenpozen in de kweekkamer of incubatoren waar ze zijn gehouden onder gecontroleerde omgevingscondities. Gegevensgebaseerde waarnemingen onder aseptische omstandigheden kunnen worden verzameld met behulp van een laminaire luchtstroomkast of een geschikt overbrengingsgebied dat voor dit doel is ontworpen, terwijl voor het microscopisch onderzoek van kweken de gebruikelijke laboratoriumruimte wordt gebruikt.

Plantaardige weefselcultuur als bron van geneesmiddelen: