Urease-test op bacteriën om hun vermogen om ureum te hydrolyseren (met figuur) te achterhalen

Urease Test op bacteriën om hun vermogen om ureum te hydrolyseren (met figuur) te achterhalen!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om ureum te hydroliseren (afbraak in aanwezigheid van water) tot NH ₃ en CO ₂, omdat ze het enzym 'urease' kunnen produceren.

NH ₃ is alkalisch (basisch), waardoor het de pH verhoogt waardoor de kleur van fenolrood van geel naar roze verandert.

In de urease-test worden de testbacteriën gekweekt op agarhellingen die ureum en fenolrood bevatten. Als de bacteriën het vermogen hebben om ureum te hydrolyseren, verandert de kleur van het medium van geel in roze. Sommige bacteriën kunnen NH ₃ produceren door de peptonen in het medium af te breken. In dergelijke gevallen wordt een fout-positief resultaat verkregen.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstoppen, inentingsnaald, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, membraanfiltratieapparaat, ureum-agar, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. Vijf reageerbuizen zijn van katoenstof voorzien, afgedekt met handgeschept papier en met draad of rubberen band vastgemaakt (figuur 7.15).

2. De bestanddelen van het ureumagarmedium (die ureum als hoofdbestanddeel bevat) of het kant-en-klaar poeder (behalve ureum) dat voor 100 ml medium is vereist, worden gewogen en opgelost in 90 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml met trillen en kronkelen.

3. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en aangepast tot 6, 9 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is.

4. De kolf wordt verwarmd om de agar volledig in het medium op te lossen.

5. De fles is van katoenstof voorzien, bedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band vastgemaakt.

6. De vijf reageerbuizen en de erlenmeyer bevattende ureumagar (behalve ureum) worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) in een autoclaaf gesteriliseerd.

7. Na sterilisatie worden ze uit de autoclaaf verwijderd en laten ze enige tijd afkoelen zonder het medium te laten stollen. Koeling van het medium voorkomt condensatie en ophoping van waterdruppels op de hellingen. Als het medium al tijdens opslag is bereid en gestold, moet het vloeibaar worden gemaakt door het voorzichtig te verhitten totdat het volledig is gesmolten.

8. 20% ureumoplossing wordt bereid door 20 gram ureum op te lossen in 100 ml gedestilleerd water en wordt gesteriliseerd met behulp van membraanfiltratie-apparatuur, omdat ureum niet kan worden gesteriliseerd door warmte, omdat het bij verwarming ontleedt.

9. 10 ml van de gesteriliseerde ureumoplossing wordt aseptisch grondig gemengd met 90 ml gesteriliseerd, gekoeld vloeibaar gemaakt medium (vloeibaar gemaakt door verhitting).

10. Voordat het stolt, wordt het medium, in warme gesmolten toestand, aseptisch verdeeld in de 5 met katoen verstopte gesteriliseerde reageerbuizen (elk ongeveer 20 ml).

11. De reageerbuizen worden in een schuine positie gehouden om het medium af te koelen en te laten stollen, om ureum-agar-scheuten te krijgen.

12. De testbacteriën worden aseptisch geënt, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, in de hellingen door steken in de kolf en strepen op het oppervlak van de hellingen met behulp van een met vlam gesteriliseerde naald. De naald wordt na elke inoculatie gesteriliseerd.

13. De geënte hellingen worden 24 uur geïncubeerd bij 37 ° C in een incubator.