Phenylalanine Deaminize Test op bacteriën om hun vermogen om het aminozuur te deamineren te achterhalen (met figuur)

Lees dit artikel om meer te weten te komen over de fenylalanine-deaminaattest op bacteriën om te zien in hoeverre ze het aminozuur kunnen deamineren!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen het aminozuur fenylalanine te deamineren, omdat ze het enzym 'phenylalanine-deaminase' kunnen produceren.

Dit enzym deamineert fenylalanine door de aminogroep ervan te verwijderen, waardoor fenylpyrodruivenzuur (een ketozuur) en ammoniak (NH ₃ ) worden geproduceerd. Phenylpyruvic zuur vormt groene kleur met oplossing van ferrichloride.

In de fenylalanine-deaminase-test wordt de testbacterie gekweekt op agarhellingen die fenylalanine bevatten. Als de bacteriën het vermogen hebben om fenylalanine te deamineren, verandert de kleur van de hellingen van geel in groen, bij het laten vallen van ferrichlorideoplossing erop.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, fenylalanine-agar, ijzer (III) chloride-oplossing (10%), geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. De bestanddelen van fenylalanine-agarmedium (die fenylalanine als de hoofdcomponenten bevatten) of het kant-en-klaar poeder ervan dat voor 100 ml medium is vereist, worden gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en wervelen ( Figuur 7.17).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 2 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is.

3. De kolf wordt verwarmd om de agar volledig in het medium op te lossen.

4. Voordat het stolt, wordt het medium in warme gesmolten toestand verdeeld in 5 reageerbuizen (elk ongeveer 20 ml).

5. De reageerbuisjes zijn van katoenstof voorzien, afgedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band verbonden.

6. Ze worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) gesteriliseerd in een autoclaaf.

7. Na sterilisatie worden ze uit de autoclaaf verwijderd en in een schuine stand gehouden om het medium af te koelen en te laten stollen om fenylalanine-agar-scheef te krijgen.

8. De testbacteriën worden aseptisch geënt, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, door uitstrijken op het oppervlak van de hellingen met behulp van een met vlam gesteriliseerde lus. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

9. De geënte hellingen worden gedurende 24 tot 48 uur in een incubator bij 37 ° C geïncubeerd.

10. Aan elke helling wordt 4-5 druppels ijzer (III) chloride-oplossing (10%) toegevoegd.