Oxidatie-fermentatietest op bacteriën om hun vermogen om glucose te gebruiken te achterhalen (met figuur)

Oxidatie-fermentatietest op bacteriën om hun vermogen om glucose aëroob (oxidatief) of anaeroob (fermentatief) te gebruiken te achterhalen!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om glucose te gebruiken. Sommigen gebruiken het alleen in aanwezigheid van zuurstof (os datief of aëroob), terwijl de anderen, behalve dat ze aëroob worden gebruikt, het ook kunnen gebruiken in afwezigheid van zuurstof (fermentatief of anaëroob).

Een bacterie die glucose kan fermenteren, moet dus in staat zijn om het te oxideren, maar een bacterie die glucose kan oxideren, mag het niet vergisten. Als op beide manieren glucose wordt gebruikt, wordt er zuur geproduceerd, waardoor de pH de kleur van broomcresolpaars verandert van paars naar geel.

Bij de oxidatie-fermentatietest (O / F-test) worden de testbacteriën aëroob en anaëroob afzonderlijk gekweekt, in halfvaste agarbuizen die glucose en broomcresolpaars bevatten. Als de bacteriën het vermogen hebben om glucose te gebruiken, verandert de kleur van het medium van paars naar geel. Als het aërobe glucose gebruikt, is het oxidatief en als het anaëroob glucose gebruikt, is het fermentatief.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, Hugh-Leif-zoon glucosebouillon, vloeibare paraffine, geïsoleerde kolonies of zuivere bacteriënculturen.

Procedure:

1. De ingrediënten van Hugh-Leifson glucosebouillon medium (HLGB) (dat glucose en broomresol bevat als hoofdbestanddelen) of het kant-en-klare poeder dat nodig is voor 100 ml bouillon wordt gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een Erlenmeyer van 250 ml door schudden en wervelen (figuur 7.9).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 4 met behulp van 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is.

3. Na het instellen van de pH wordt agar toegevoegd. Hier wordt minder agar gebruikt om een halfvast medium te verkrijgen, om het steken te vergemakkelijken.

4. De kolf wordt verwarmd om de agar volledig in het medium op te lossen.

5. Voordat het stolt, wordt het medium in warme gesmolten toestand verdeeld in twee sets reageerbuizen (elk ongeveer 5 ml); elke set met vijf reageerbuisjes.

6. De reageerbuisjes zijn van katoenstof voorzien, bedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band vastgemaakt.

7. De bouillonbuizen worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) in een autoclaaf gesteriliseerd.

8. De bouillonbuizen mogen afkoelen tot kamertemperatuur.

9. Vloeibare paraffine wordt gesteriliseerd door gedurende 3 uur in een heteluchtoven op 180 ° C te verwarmen.

10. De testbacteriën worden aseptisch geënt, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in alle gesteriliseerde, halfvaste bouillonbuizen door steken met behulp van een met vlam gesteriliseerde entlus. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

11. De gesteriliseerde vloeibare paraffine wordt voorzichtig aseptisch gegoten in een set van geënte buizen (ongeveer 1 cm hoog op het medium) om een anaerobe toestand te verschaffen.

12. Alle geënte bouillonbuizen worden 24 uur geïncubeerd bij 37 ° C in een incubator.