Nitraatreductietest op bacteriën om het vermogen om nitraten te verminderen te achterhalen

Lees dit artikel om meer te weten te komen over de prestaties van de nitraatreductietest op bacteriën om hun vermogen om nitraten te verminderen te achterhalen!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om nitraten te verminderen, omdat ze het enzym 'nitraatreductase' kunnen produceren.

Dit enzym, in aanwezigheid van geschikte elektronendonor, vermindert nitraten (N03 - ) tot nitrieten (N0 - ). De aanwezigheid van N02 - wordt aangegeven door sulfanilzuur en a-naftylamine, die de kleur in rood veranderen.

Bij de nitraatreductietest worden de testbacteriën gekweekt in een bouillonmedium dat nitraat (N03 - ) bevat. Als de bacteriën het vermogen hebben om nitraten te verminderen, verkrijgt de bouillon een rode kleur bij toevoeging van sulfanilzuur en a-naftylamine.

Als er geen rode kleur wordt geproduceerd, geeft dit aan dat N03 - helemaal niet door de bacteriën wordt gereduceerd of dat de bacterie een zeer krachtig nitraatreductase-enzym produceert, dat N03 - daarna N02 - snel tot NH 3 en N 2 vermindert . Om dit te bevestigen, wordt een kleine hoeveelheid zinkstof toegevoegd, waardoor NO 3 -, indien beschikbaar in het medium, tot N0 2 - wordt gereduceerd, waardoor rode kleur wordt geproduceerd.

Dus als rode kleur wordt geproduceerd, geeft dit aan dat N03 - in het medium onveranderd aanwezig is en dat de bacteriën niet in staat zijn om nitraten te verminderen. Als er geen rode kleur wordt geproduceerd, geeft dit aan dat de N03 - is verlaagd tot boven N 2 - tot NH 3 en N 2 en dat de bacteriën het vermogen hebben om nitraten te verminderen.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstoppen, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, nitraatkweek, zinkstof, nitraatreagens Oplossing A, nitraatreagens Oplossing B, geïsoleerde kolonies of zuivere bacteriënculturen.

Procedure:

1. De ingrediënten van nitraatbodemvloeistof (die nitraat als hoofdbestanddeel bevat) of het kant-en-klaar poeder dat voor 100 ml van de bouillon is vereist, worden gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en zwenken ( Figuur 7.10).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 2 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is. De kolf wordt, indien nodig, verwarmd om de ingrediënten volledig op te lossen.

3. De bouillon wordt verdeeld in vijf reageerbuizen (elk ongeveer 10 ml), met katoen bedekt, bedekt met ambachtelijk papier en met draad of rubberen band gebonden.

4. De bouillonbuizen worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) in een autoclaaf gesteriliseerd.

5. De bouillonbuizen mogen afkoelen tot kamertemperatuur.

6. De testbacteriën worden aseptisch, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, in de bouillon geïnoculeerd met behulp van een entcuvus die is gesteriliseerd over bunsenvlam. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

7. De geïnoculeerde bouillonbuizen worden 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd in een incubator.

8. 0, 5 ml van elk van het nitraatreagens Oplossing A (die sulfanilzuur bevat) en nitraatreagens Oplossing B (die a-naftylamine bevat) wordt in elke reageerbuis toegevoegd, goed geschud en kleurverandering wordt na 15 minuten waargenomen.

opmerkingen:

1. Rode kleur geproduceerd: Nitraatreductie positief.

2. Rode kleur niet geproduceerd: zinkstof is toegevoegd.

(een) Rode kleur geproduceerd: Nitraatreductie negatief.

(B) Rode kleur niet geproduceerd: Nitraatreductie positief.