Methyl Red-test om het vermogen van bacteriën te vinden om glucose te gebruiken (met figuur)

Lees dit artikel om meer te weten te komen over de methylrood-test (MR-test) om na te gaan in hoeverre een bacterie glucose kan gebruiken bij de productie van een stabiel zuur als eindproduct!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om glucose te gebruiken en om te zetten in een stabiel zuur zoals melkzuur, azijnzuur of mierenzuur als het eindproduct.

Deze bacteriën metaboliseren in eerste instantie glucose tot pyrodruivenzuur, dat verder wordt gemetaboliseerd via de 'mixed acid pathway' om het stabiele zuur te produceren.

Het type geproduceerde zuur verschilt van soort tot soort en is afhankelijk van de specifieke enzymatische routes die in de bacteriën aanwezig zijn. Het aldus geproduceerde zuur verlaagt de pH tot 4, 5 of lager, wat wordt aangegeven door een verandering in de kleur van methylrood van geel naar rood.

In de methylrood-test (MR-test) worden de testbacteriën gekweekt in een bouillonmedium dat glucose bevat. Als de bacteriën het vermogen hebben om glucose te gebruiken bij de productie van een stabiel zuur, verandert de kleur van het methylrood van geel in rood, wanneer toegevoegd aan de kweekcultuur.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstoppen, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, schenkpot, incubator, MR-VP-bouillon (methylrood-Voges Proskauer-bouillon of glucosefosfaatvloeistof), methylroodoplossing, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. De ingrediënten van MR-VP-medium (met glucose als hoofdbestanddeel) of het kant-en-klare poeder dat voor 100 ml bouillon is vereist, worden gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en wervelende. MR-VP-bouillon wordt ook glucosefosfaatbouillon genoemd (figuur 7.4).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 6, 9 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als het minder is. De kolf wordt, indien nodig, verwarmd om de ingrediënten volledig op te lossen.

3. De bouillon wordt verdeeld in vijf reageerbuizen (elk ongeveer 10 ml), met katoen bedekt, bedekt met ambachtelijk papier en met draad of rubberen band gebonden.

4. De bouillonbuizen worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) in een autoclaaf gesteriliseerd.

5. De bouillonbuizen mogen afkoelen tot kamertemperatuur.

6. De testbacteriën worden aseptisch geïnoculeerd, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in de bouillon met behulp van een entcuvus die is gesteriliseerd over bunsenvlam. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

7. De geënte bouillonbuizen worden bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur in een incubator geïncubeerd.

8. Alcoholische oplossing van methylrood (3-4 druppels) wordt in elke reageerbuis gedruppeld.

opmerkingen:

1. Rode kleur geproduceerd: MR-positief (dwz de bacteriën hebben glucose omgezet in een stabiel zuur, zoals wordt aangegeven door omzetting van methylrood van gele naar rode kleur.) Dit duidt op gemengde zure gisting.

2. Rode kleur niet geproduceerd: MR-negatief (dwz de glucose in het medium is niet omgezet in een stabiel zuur.) Dit duidt op butyleenglycolfermentatie).