Lipid Hydrolyse Test op bacteriën om hun vermogen om lipiden te hydrolyseren (met figuur) te achterhalen

Lees dit artikel om meer te weten te komen over de lipidhydrolyse-test, om erachter te komen welk vermogen een bacterie heeft om lipiden (vetten) te hydrolyseren!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om lipiden (vetten) te hydrolyseren tot glycerol en vetzuren, omdat ze het lipolytische enzym 'lipase' bezitten.

Deze bacteriën worden lipolytische bacteriën genoemd. Terwijl de lipiden een emulsie vormen, vormen ze, wanneer zij worden gedispergeerd in agar, ondoorschijnendheid, hun gehydrolyseerde eindproducten, glycerol en vetzuren, niet een dergelijke emulsie met agar, waarvoor ze niet een dergelijke opaciteit produceren; produceer liever transparantie.

Bij de lipide hydrolyse test worden de testbacteriën gekweekt op agarplaten die tributyrine bevatten als het lipidesubstraat. Tributyrine vormt een emulsie, wanneer deze in de agar wordt gedoseerd, en produceert een ondoorzichtig medium.

Als de bacteriën het vermogen hebben om lipiden te hydrolyseren, hydrolyseren de kolonies de tributyrine in het medium in de gebieden die hen omringen tot oplosbare glycerol en vetzuren (boterzuur), terwijl de rest van de gebieden van de platen niet-gehydrolyseerd tributyrine bevatten.

Dientengevolge worden transparante heldere zones rond de koloniën gevormd, omdat de gehydrolyseerde producten, glycerol en vetzuren, die daaromheen worden gevormd, geen emulsie vormen met de agar. Aan de andere kant blijven de rest van de gebieden van de platen ondoorzichtig, omdat het niet-gehydrolyseerde tributyrine in deze gebieden een emulsie vormt met de agar.

Vereiste materialen:

Petrischalen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegruimingspot, incubator, tributyrine-agar, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. Twee petrischalen worden gereinigd, afgedekt met handgeschept papier en verbonden met draad of rubberen band (figuur 7.22). Deze stap evenals de sterilisatie van de petrischalen bij stap 6 zijn weggelaten, indien ovengesteriliseerde petrischalen direct worden gebruikt.

2. De ingrediënten van tributyrine-agarmedium (exclusief tributyrine, dat de lipidecomponent is) of het kant-en-klare poeder dat voor 100 ml van het medium is vereist, worden gewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en wervelende.

3. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 2 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is.

4. De kolf wordt verwarmd om de agar volledig in het medium op te lossen.

5. Na afkoelen tot ongeveer 90 ° C wordt tributyrine toegevoegd en geëmulgeerd in een Warring-menger.

6. De fles is van katoenstof voorzien, bedekt met kraftpapier en met draad of rubberen band vastgemaakt.

7. De twee petrischalen en de erlenmeyer bevattende tributyrineagar medium worden gesteriliseerd bij 121 ° C (15 psi druk) gedurende 15 minuten in een autoclaaf.

8. Na sterilisatie worden ze uit de autoclaaf verwijderd en kunnen ze enige tijd afkoelen zonder het medium te laten stollen. Koeling van het medium voorkomt condensatie en ophoping van waterdruppeltjes in de platen. Als het medium al tijdens opslag is bereid en gestold, moet het vloeibaar worden gemaakt door het voorzichtig te verhitten totdat het volledig is gesmolten.

9. Om tributyrine-agarplaten te bereiden, voordat het gesteriliseerde tributyrine-agarmedium afkoelt en stolt, in warme gesmolten toestand, wordt het aseptisch gegoten, bij voorkeur in een laminaire stromingskamer, in de twee gesteriliseerde petrischalen (elk ongeveer 20 ml), zodat het gesmolten medium bedekt de bodem van de petrischalen volledig.

Vervolgens worden de platen bedekt met hun deksels en men laat ze afkoelen om het medium daarin te laten stollen. Tributyrin vormt een emulsie, wanneer gedispergeerd in agar, en produceert een ondoorzichtig medium. Waterdamp die kan condense- ren op het binnenoppervlak van de platen en deksels wordt verdampt door de platen en de deksels in omgekeerde positie te houden in een incubator bij 37 ° C gedurende ongeveer 1 uur.

10. Elke plaat is aan de onderkant gemarkeerd in vier kwartieren.

11. "Vlek inoculatie" van de testbacteriën wordt aseptisch gedaan, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in het midden van elk kwart door een vlek (of klein uitstrijkje) van de bacteriën te maken met behulp van een vlamgesteriliseerde lus. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

12. De geënte platen worden geïncubeerd in omgekeerde positie, van bovenaf, bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur in een incubator totdat kolonies van de bacteriën zichtbaar zijn.