Voer een experiment uit om basiskleuring van bacteriën uit te voeren om de vorm, grootte en plaatsing ervan te observeren

Streef ernaar om eenvoudige basische kleuring van bacteriën uit te voeren, om de vorm, grootte en opstelling ervan te observeren.

Doel:

Het is niet mogelijk om de natuurlijke vorm, grootte en rangschikking van bacteriën te observeren door middel van basische kleuring, omdat deze kenmerken worden vervormd door warmte-fixatie.

Bovendien zijn sommige bacteriën (bijv. Spirilli) moeilijk te kleuren.

Negatieve kleuring wordt dus om twee redenen als volgt uitgevoerd:

(een) Om de natuurlijke vorm, grootte en rangschikking van bacteriën te observeren, aangezien hier geen warmte-fixatie wordt gedaan.

(B) Om die bacteriën waar te nemen die moeilijk te bevlekken zijn?

Beginsel:

Bacteriecellen dragen negatieve lading op hun oppervlak, waardoor ze worden omgeven door kationen, zoals Na ⁺ en K ⁺ (Figuur 5.9). Bij zure kleuring wordt een zure kleuring gebruikt, die ioniseert tot een anionisch chromogeen (negatief geladen kleurstofion) en een kation.

De negatief geladen chromogenen worden afgestoten door de negatieve lading van het oppervlak op de bacteriecellen, waardoor de kleurstof de cel niet kan binnendringen. Nu zijn de niet-gekleurde cellen gemakkelijk waarneembaar tegen de gekleurde achtergrond.

Vereiste materialen:

Dia's, lus, zure kleur (eosine / nigrosine), bouillon / plaat / schuine cultuur van bacteriën, microscoop, immersieolie.

Procedure:

1. Een dia wordt op de juiste manier schoongemaakt onder leidingwater, zodat water niet als druppels op het oppervlak achterblijft (Figuur 5.10).

2. Het aanhangende water wordt weggevaagd met absorberend papier en de dia wordt aan de lucht gedroogd.

3. Een kleine druppel van de zure kleuring (nigrosine / eosine) wordt dichtbij een uiteinde van de schuif geplaatst.

4. Een lus wordt gesteriliseerd over vlammen en gekoeld. Aseptisch wordt een lus van bacteriën van agarplaat of helling of een lus van bacteriesuspensie van een vloeibare bouillon overgebracht naar de druppel vlekken. Een suspensie van bacteriën in de vlek wordt gemaakt door de bacterielus voorzichtig in de druppel vlekken te mengen, op een zodanige manier dat de druppel zich niet verspreidt.

5. Een andere schone dia wordt onder een hoek van 30 ° ten opzichte van de eerste dia gehouden, zodanig dat één smalle rand van de eerste het oppervlak van de laatste dia aan het einde raakt zonder dat de vlek valt.

6. In die schuine positie wordt de tweede schuif naar voren getrokken in de richting van de vlek, totdat de rand ervan de druppel raakt en de druppel zich langs de rand verspreidt.

7. In die hellende positie wordt de tweede schuif naar achteren geduwd om een dun uitstrijkje van bacteriën te vormen.

8. Het uitstrijkje is aan de lucht gedroogd. Warmte-fixatie is hier niet gedaan.

9. De dia wordt op het microscoopstadium geknipt en het uitstrijkje wordt waargenomen bij een laag energieverbruik en hoge droge doelen.

10. Een druppel onderdompelingsolie wordt op het uitstrijkje aangebracht.

11. Het uitstrijkje wordt waargenomen onder het doel om olie te dompelen.