Experiment: Motiliteitstest van een bacterie: door hangende druppelvoorbereiding (met figuur)

Probeer de motiliteitstest van een bacterie uit te voeren door de druppelvoorbereiding op te hangen om uit te vinden of het motiel of niet-beweeglijk is.

Doel:

Motiliteit betekent het vermogen van beweging door eigen kracht. Op basis van motiliteit kunnen bacteriën als volgt in twee groepen worden verdeeld.

(1) Motiele bacteriën:

Een bacterie, die het intrinsieke vermogen heeft tot beweging in het omringende medium, waarin het blijft zweven, is een beweeglijke bacterie.

(2) Niet-beweeglijke bacteriën:

Een bacterie, die niet het intrinsieke vermogen heeft tot beweging in het omringende medium, waarin het blijft zweven, is een niet-beweeglijke bacterie. Niet-beweeglijke bacteriën kunnen schijnbare beweeglijkheid vertonen als gevolg van hun bruinachtige beweging veroorzaakt door het bombardement van de watermoleculen in het omringende medium op de bacteriecellen.

Bij natte montage, hoewel de vorm en de grootte van de bacteriën kunnen worden waargenomen, kan de beweeglijkheid worden belemmerd, omdat de ophanging tussen de schuif en de dekglaasje wordt gedrukt. Dat is de reden; hangende druppel voorbereiding of motiliteitstest wordt uitgevoerd voor een duidelijke observatie van de beweeglijkheid van bacteriën, naast hun vorm en grootte. Het is nuttig bij de identificatie van bacteriën.

Beginsel:

Een zeer kleine druppel bacteriesuspensie wordt aan het midden van een dekglaasje gehangen in de holte van een holteschuif. De hangende druppel wordt onder een microscoop waargenomen met behulp van olie-immersieobjectief. Als de bacteriën beweeglijk zijn, kunnen de cellen ervan grillige bewegingen in het omringende medium vertonen.

Als het daarentegen niet-beweeglijk is, blijven de cellen statisch in het medium zonder enige beweging of kunnen ze een bruine beweging vertonen als gevolg van het bombardement door de watermoleculen in het medium op de bacteriecellen.

Vereiste materialen:

Spouwglijbaan, dekglaasje, vaseline of vaseline, onderdompelingsolie, 24-uurs oude bouilloncultuur van bacteriën, lus en microscoop (verbinding, donkerveld of fasecontrast).

Procedure:

1. Een holteslede wordt op de juiste manier schoongemaakt onder leidingwater, zodat water niet als druppels op het oppervlak achterblijft. Een caviteitslide is een glasplaatje met in het midden een kleine ronde verlaging waarin een kleine druppel bacteriesuspensie kan hangen (Figuur 5.3).

2. De dia wordt gedroogd door met absorberend papier af te vegen en vervolgens over een vlam te bewegen of in de zon te laten staan.

3. Een ring vaseline (of vaseline) wordt aangebracht rond de holte.

4. Een lus wordt gesteriliseerd over vlammen en gekoeld. Een bolvormige bacteriesuspensie wordt aseptisch afgenomen van de 24-uurs bouilloncultuur. Een kleine druppel van de suspensie wordt in het midden van een dekglaasje geplaatst. De bouilloncultuur mag niet meer dan 24 uur oud zijn, omdat bacteriën hun beweeglijkheid kunnen verliezen als ze ouder worden.

5. De holteschuif wordt omgekeerd en op de dekglaasje geplaatst, op een zodanige manier dat de holte de druppel bedekt.

6. De schuif en de dekglaasjes worden voorzichtig tegen elkaar gedrukt, zodat de holte wordt verzegeld. Er moet voor worden gezorgd dat geen enkel deel van de holte de druppel raakt.

7. De dia wordt snel omgekeerd, zodat de druppel in de holte hangt zonder deze aan te raken.

8. De dia wordt geknipt op het niveau van de microscoop.

9. De rand van de druppel is scherpgesteld met een laag vermogen.

De redenen voor het scherpstellen van de rand van de drop zijn als volgt:

(a) Een beter contrast wordt verkregen door verschil in de brekingsindex van de druppel en de deklaag.

(b) Als de druppel blijft hangen, wordt deze naar de rand toe smaller, waarbij de rand minder bacteriën bevat die duidelijk voor motiliteit moeten worden waargenomen.

(c) Gewoonlijk komen aerobe bacteriën naar de rand om meer zuurstof voor de ademhaling te krijgen, waarvoor ze op de rand kunnen worden waargenomen.

10. Een druppel onderdompelingsolie wordt op de dekglaasje net boven de hangende druppel gelegd en de rand van de hangende druppel wordt waargenomen onder het olie-immersieobjectief van de microscoop. Bij voorkeur moet een fasecontrast- of donkerveldmicroscoop worden gebruikt voor duidelijke waarneming.

Observations (Under Oil-immersion Objective):

1. Motiliteit:

Motiel of niet-beweeglijk

2. Vorm van bacteriën:

Bolvormig (coccus)

Staafvormig (bacilli)

Komma-achtig (vibrio)

Spiraal (spirocheten)

3. Regeling van bacteriën:

Paren (diplobacillus / diplococcus)

In vieren (tetrads)

In ketens (streptococcus / streptobacillus)

Druifachtige clusters (staphylococcen)

Cuboidal (sarcinae of octet).

4. Grootte van bacteriën:

Maak met behulp van het oog een tekening van het veld onder het object met olie-immersie.

(3) Kleuring:

Doel van kleuring:

De brekingsindex van bacteriecellen komt heel dicht in de buurt van die van water, waarin ze tijdens observatie worden gesuspendeerd en ook van die van de glasplaat, waarop ze onder een microscoop worden waargenomen. Daarom is het erg moeilijk om ze duidelijk te observeren.

Om deze moeilijkheid te overwinnen, zijn de cellen gekleurd door vlekken, die de cellen een diepe kleur geven en een lichte kleur aan het omgevende medium, waarin ze zijn gesuspendeerd. De diepgekleurde cellen krijgen een duidelijk contrast met de lichtgekleurde achtergrond en kunnen duidelijk worden waargenomen.

Kleuring is dus een methode voor het verlenen van kleur aan de anders kleurloze transparante micro-organismen met behulp van verschillende biologische kleurstoffen die 'vlekken' worden genoemd vanwege hun microscopische waarneming.

Chemistry of Stains:

Kleurstoffen zijn als volgt van drie soorten:

1. Kleurstoffen:

Ze worden gebruikt voor algemene kleuring, zoals voor het kleuren van textielmaterialen en voor het kleuren van muren.

2. Vlekken:

Ze worden gebruikt voor het inkleuren van biologisch of microbiologisch specimen. Deze zijn nauwkeuriger en veeleisender.

3. Indicatoren:

Het zijn chemicaliën, die van kleur veranderen met verandering in waterstofionenconcentratie (pH).

Hoewel 'vlek' de juiste term is, wordt de term 'kleurstof' in de microbiologie veel gebruikt als kleurstof. In het verleden werden natuurlijke kleurstoffen bereid uit verschillende planten. Ze zijn op grote schaal vervangen door synthetische kleurstoffen.

Omdat de eerste synthetische kleurstof werd bereid uit aniline, worden alle synthetische kleurstoffen 'anilinekleurstoffen' genoemd. De meeste van deze kleurstoffen worden nu echter gemaakt uit koolteer, waarvoor ze nu 'koolteerkleurstoffen' worden genoemd. De koolteerkleurstoffen zijn benzeenderivaten. Een kleurstofmolecuul bestaat uit drie componenten (Figuur 5.4) zoals hieronder weergegeven.

(a) Een benzeenring

(b) Een chromofoor groep

(c) Een auxochrome groep

Benzeen is een organisch kleurloos oplosmiddel, terwijl de chromofoor de kleurende component van de kleurstof is. Benzeen combineert met de chromofoor om chromogeen te vormen (Figuur 5.5). Omdat chromogeen niet de eigenschap heeft om te dissociëren, kan het niet combineren met de cellen en wordt het gemakkelijk weggespoeld.

Wanneer een chromogeen combineert met een auxochroom, wordt een kleurstof of vlek gevormd. De auxochrome verleent de elektrolytische dissociatie-eigenschap (zoutvormende eigenschap) aan de kleurstof. Zo wordt chemisch een vlek gedefinieerd als een organische verbinding die een benzeenring, een chromofoorgroep en een auxochrome groep bevat.

Soorten kleuring:

Kleuring van bacteriën is van verschillende typen, zoals hieronder wordt beschreven (Figuur 5.6).

I. Eenvoudige kleuring:

Hier wordt slechts één vlek gebruikt. Deze kleuring wordt gebruikt voor het waarnemen van de vorm (cocci, bacilli, vibrio, spirilli) en ordening (enkele, paar, tetrad, keten, cluster) van bacteriën.

Het is van twee soorten als volgt:

A. Basiskleuring:

Bij basische kleuring, wordt een basische kleuring, zoals methyleenblauw, kristalviolet of carbol fuchsine, gebruikt om de bacteriecellen te kleuren. De vlek bindt stevig aan de bacteriecellen en verleent een diepe kleur van de vlek aan de cellen, terwijl het omringende medium een ​​lichte kleur van de vlek krijgt.

B. Zure kleuring:

Bij zure kleuring wordt een zure kleuring, zoals eosine of nigrosine, gebruikt om de bacteriecellen negatief te kleuren. De vlek maakt de omgeving gekleurd, terwijl de bacteriecel kleurloos blijft.

II. Differentiële kleuring:

Hier worden meer dan één vlekken gebruikt. Het wordt uitgevoerd voor de volgende doeleinden.

A. Scheiding in groepen:

Deze differentiële kleuringsmethoden worden uitgevoerd om bacteriën in verschillende groepen te differentiëren op basis van hun kleurkenmerken.

Deze methoden omvatten het volgende:

(een) Gramkleuring:

Deze kleuringswerkwijze wordt uitgevoerd om onderscheid te maken tussen gram-positieve en gram-negatieve bacteriën.

(b) Acid-fast Staining:

Het wordt uitgevoerd om onderscheid te maken tussen zuurvaste en niet-zuurvaste bacteriën.

B. Visualisatie van specifieke structuren van bacteriën:

Deze differentiële kleuringstechnieken worden uitgevoerd om specifieke structurele componenten van bacteriecellen te visualiseren.

Deze methoden omvatten het volgende:

(een) Spore-kleuring:

Deze kleurmethode wordt gebruikt om endospore van sporenvormende bacteriën te kleuren.

(b) Capsule kleuring:

Deze methode wordt gebruikt om de capsule te bevlekken, die de gekapselde bacteriën omgeeft.

(c) Flagella kleuring:

Het wordt uitgevoerd om flagella van flagellated bacteriën te visualiseren.

(d) Insluitingskleuring:

Deze kleuringswerkwijze wordt uitgevoerd om de celinsluitsels van bacteriecellen zoals volutinekorrels, glycogeengranulen en PBH-korrels te kleuren.