Experiment voor identificatie van onbekende bacteriën (met figuur)

Experiment voor identificatie van onbekende bacteriën!

Beginsel:

Identificatie van onbekende bacteriën is een van de belangrijkste verantwoordelijkheden van de microbiologen. Monsters van bloed, weefsel, voedsel, water en cosmetica worden dagelijks in laboratoria over de hele wereld onderzocht op de aanwezigheid van verontreinigende micro-organismen.

Daarnaast zijn industriële organisaties voortdurend bezig met het screenen van materialen om nieuwe antibiotica producerende microben of microben te isoleren die de opbrengst van verhandelbare producten, zoals vitaminen, oplosmiddelen en enzymen, zullen verhogen. Eenmaal geïsoleerd, moeten deze onbekende microben worden geïdentificeerd en geclassificeerd.

De wetenschap van classificatie wordt taxonomie genoemd en gaat over de scheiding van levende organismen in onderling verbonden groepen. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8e editie, is de officiële taxonomische sleutel die de orders, families, geslachten en soorten van alle bekende geclassificeerde bacteriën bevat (Appendix III).

Met de fundamentele kennis in kleuringsmethoden, isolatietechnieken, bacteriële voeding, biochemische activiteiten en groeikenmerken van bacteriën, wordt het gemakkelijker om eventuele onbekende bacteriën te identificeren.

Kenmerken van enkele bacteriën zijn gegeven in Tabel 7.2. Andere bacteriën kunnen op een vergelijkbare manier worden geïdentificeerd op basis van de waarnemingen en resultaten die zijn verkregen na de experimentele procedures.

Vereiste materialen:

Dia's, holteleiders, petrischalen, erlenmeyers, katoenproppen, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, voedingsbodem, voedingsagar, gramkleuringreagentia, media en reagentia voor biochemische testen, samengestelde microscoop geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. Gram-kleuring van de onbekende bacteriën wordt uitgevoerd. Naast gramkleuring worden ook de morfologie en rangschikking vastgelegd. De motiliteitstest van de bacteriën wordt bepaald door hangende druppelpreparaten (figuur 7.25).

2. Met behulp van de steriele inoculatietechniek wordt de bacterie geïnoculeerd in twee agarhellingen met voedingsstoffen, een voedingsbodembuis en met een voedingsmiddel-agarplaat door middel van streak-inoculatie. Na incubatie wordt één schuine cultuur gebruikt om de culturele kenmerken van de onbekende bacteriën te bepalen.

De tweede wordt gebruikt als een voorraadsubcultuur, mocht het nodig zijn om een ​​van de tests te herhalen. Groei-eigenschappen worden ook waargenomen in de bouillonbuis en koloniekarakteristieken op de plaat.

3. Uitoefenend zorg in steriele techniek, om culturen niet te vervuilen en daardoor valse resultaten te verkrijgen, worden de bacteriën in respectieve media ingeënt om de verschillende biochemische tests uit te voeren.

4. De geïnoculeerde media worden geïncubeerd bij de vereiste temperaturen gedurende de vereiste tijdsduur.

opmerkingen:

1. In gramkleuring worden naast gram-reactie ook de morfologie en rangschikking van de bacteriën vastgelegd.

2. De culturele kenmerken van de bacteriën in voedingsbodem, op agarhoek en op voedingsagarplaat worden genoteerd.

3. Resultaten van de biochemische reacties worden geregistreerd.

Interpretatie van resultaten:

1. Met behulp van de hierboven opgenomen gegevens (zie bijvoorbeeld tabel 7.1) en met behulp van de Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, wordt de bacterie geïdentificeerd als zijn soort en soort. Houd er rekening mee dat de resultaten kunnen variëren afhankelijk van de stammen van elke gebruikte soort en de tijdsduur dat de bacteriën in de stamcultuur zijn gehouden.

De waargenomen resultaten zijn mogelijk niet helemaal identiek aan de verwachte resultaten. Daarom wordt de bacterie gekozen die het beste bij de resultaten past. De identificerende kenmerken van enkele bacteriën hebben gegeven in tabel 7.2.

2. Als alternatief, met behulp van de hierboven opgenomen gegevens, worden codenummers gegeven voor de geregistreerde resultaten (zie tabel 7.3) en de bacteriën gemakkelijk geïdentificeerd met behulp van een computerprogramma dat beschikbaar is voor Apple II, IBM PC of TRS-80.

Het programma is ontworpen om de onbekende bacteriën te identificeren op basis van het percentage van overeenkomst tussen de onbekende bacteriën en de bekende bacteriën met betrekking tot de bovenstaande waarnemingen.

Om het programma voor de Apple II of IBM-PC te starten:

(a) De schijf is in de linker schijf geplaatst.

(b) De computer is ingeschakeld.

(c) De programmainstructies worden gevolgd door het typen van de antwoorden, onbekend bacterienummer en codenummers als de vragen op het scherm verschijnen.

Om het programma voor de TRS-80 te starten:

(een) De computer is ingeschakeld.

(B) De schijf is in de onderste schijf geplaatst.

(C) De oranje knop is ingedrukt.

(D) Wanneer u wordt gevraagd, wordt "datum (MM / DD / JJ) ingevoerd.

(E) Oranje knop wordt opnieuw ingedrukt.

(f) De programmainstructies worden gevolgd door de antwoorden, het onbekende aantal bacteriën en codenummers in te typen terwijl de vragen op het scherm verschijnen.

E. Geautomatiseerde methoden voor de identificatie van onbekende bacteriën:

Identificatie van onbekende bacteriën door middel van de handmatige methode met behulp van kleurreacties, motiliteitstest, culturele kenmerken en biochemische tests is een omslachtig, langdurig en tijdrovend proces. Om het proces eenvoudig en kort te maken, zijn er automatische methoden ontwikkeld.

Deze methoden gebruiken in principe dezelfde biochemische tests als gebruikt in de handmatige methoden, maar hier wordt het op een automatische manier uitgevoerd en de interpretatie gebeurt met een computerondersteund programma.

Twee van dergelijke systemen die momenteel worden gebruikt voor de automatische identificatie van bacteriën worden als volgt gegeven:

1. MINI API-systeem

2. VITEK 2-systeem

F. Verdere bevestiging:

(1) Serologische tests:

Serologische tests kunnen worden uitgevoerd voor verdere bevestiging van de geïdentificeerde bacteriën. Aan een suspensie van de geïdentificeerde bacteriën (zeg X), wordt een druppel van het antiserum (anti-X) tegen die bacterie gemengd. Als het resulteert in de vorming van klonten of precipitaten (X-anti-X-complex), wordt de identificatie bevestigd.

De antisera voor verschillende bacteriën zijn in de handel verkrijgbaar. Ze worden commercieel geproduceerd in verschillende laboratoria. Het antiserum van bepaalde bacteriën wordt geproduceerd door gedode of verzwakte cellen van die bacteriën (zeg X) in een laboratoriumdier te injecteren.

Als afweermechanisme produceert het gastheerdier antilichamen (anti-X) tegen die bacterie, die in het bloed blijft. Het bloed wordt verzameld van dit dier en het serum wordt geïsoleerd met speciale technieken. Dit serum, dat een antilichaam tegen die bacterie bevat, wordt het antiserum van die bacterie genoemd.

(2) PCR-test:

De Polymerase Chain Reaction (PCR) -test is een snelle moleculaire methode voor de bevestiging van de geïdentificeerde bacteriën. Deze techniek wordt heel vaak gebruikt voor het snel en precies detecteren van verschillende bacteriën en virussen.