Experimenteer om het vermogen van bacteriën te vinden om verschillende aminozuren te decarboxyleren (met figuur)

Experimenteer om het vermogen van bacteriën om verschillende aminozuren te decarboxyleren!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om verschillende aminozuren te decarboxyleren tot overeenkomstige amines en CO 2 omdat ze respectievelijke 'aminozuurdecarboxylase'-enzymen kunnen produceren.

Onder hen kan elke bacterie slechts enkele van de aminozuren decarboxyleren, terwijl het de andere niet decarboxyleert.

Dus, de aminozuren, die een bacterie kan decarboxyleren en de aminozuren, die het niet kan is het kenmerk van de bacteriën. De aminozuurdecarboxylasetest wordt uitgevoerd om, afzonderlijk, het vermogen van een bacterie om aminozuren zoals lysine, ornithine en argentine te decarboxyleren met de productie van CO en respectievelijke aminen zoals cadaverine, putrescine en agmatine te testen.

Als de bacteriën kunnen

decarboxylate een of meer van de aminozuren, respectieve amines worden geproduceerd, die alkalisch (basisch) zijn en daarom de pH verhogen waardoor de kleur van broomcresolpaars van geel naar paars verandert.

In de aminozuurdecarboxylasetest worden de testbacteriën anaëroob gekweekt in een medium dat glucose, broomresolpurple en een van de aminozuren bevat. De kleur van de bouillon verandert aanvankelijk van paars naar geel als gevolg van de pH-daling als gevolg van de zuren die worden geproduceerd door fermentatie van glucose. Als de bacteriën het vermogen hebben om het aminozuur te decarboxyleren, verandert de kleur van de bouillon van geel terug naar paars.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, aminozuur decarboxylase bouillon, aminozuren (lysine, ornithine, arginine), vloeibare paraffine, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. De ingrediënten van aminozuur-decarboxylase-medium (die glucose en broomkresol paars als de hoofdcomponenten bevatten) of het kant-en-klare poeder dat voor 400 ml van de bouillon nodig is, worden gewogen en opgelost in 400 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 500 ml. door te schudden en te draaien (figuur 7.11).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 2 met 0, 1 N HCI als het meer is of met 0, 1 N NaOH als dit minder is. De kolf wordt, indien nodig, verwarmd om de ingrediënten volledig op te lossen.

3. De bouillon van 400 ml wordt verdeeld in vier erlen kolven van 250 ml, zodat elke kolf 100 ml van de bouillon bevat.

4. Aan drie van deze kolven worden drie aminozuren, zoals lysine, ornithine en arginine afzonderlijk toegevoegd (0, 5 gram elk) en één wordt bewaard zonder enig aminozuur om als controle te dienen. De besturing wordt gebruikt om onderscheid te maken tussen de tweestapsveranderingen in het testmedium (van paars naar geel en van geel naar paars).

5. De bouillons in de vier erlenmeyers worden verdeeld in vier afzonderlijke sets reageerbuizen (elk ongeveer 10 ml), met katoen verstopt, bedekt met knutselpapier en met draad of rubberen band vastgemaakt.

6. De bouillonbuizen worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) gesteriliseerd in een autoclaaf.

7. De bouillonbuizen mogen afkoelen tot kamertemperatuur.

8. Vloeibare paraffine wordt gesteriliseerd door gedurende 3 uur in een heteluchtoven op 180 ° C te verwarmen.

9. De testbacteriën worden aseptisch geïnoculeerd, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in de bouillon met behulp van een entcuvus gesteriliseerd over bunsenvlam. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

10. De gesteriliseerde vloeibare paraffine wordt voorzichtig aseptisch in de geïnoculeerde buizen gegoten (ongeveer 1 cm hoog op het medium) om anaërobe conditie te verschaffen.

11. De geënte bouillonbuizen worden geïncubeerd bij 37 ° C in een incubator en dagelijks geobserveerd totdat de test positief is of gedurende een maximale periode van 4 dagen.

opmerkingen: