Experiment om een ​​dierlijk virus te cultiveren in embryoschimmelei (met figuur)

Experimenteer met het cultiveren van dierlijk virus in geëmbryoneerd kippenei!

Beginsel:

Virussen kunnen alleen in levende systemen groeien. Ze kunnen niet groeien in niet-levende media zoals voedingsagar of voedingsbodem. Daarom vereist hun cultivatie gastheercellen die gevoelig zijn voor het specifieke virus.

Het virus zoals bacteriofaag, dat infecteert en groeit in bacteriecellen, wordt gekweekt met behulp van culturen van bacteriecellen als het levende systeem.

De viruscolipaag (een bacteriofaag) wordt bijvoorbeeld gekweekt met behulp van de kweek van de bacterie E. coli. Daarentegen vereisen dierenvirussen, die infecteren en groeien in het lichaam van dieren, vatbare systemen voor levende dieren.

De drie systemen voor levende dieren die worden gebruikt voor de teelt van dierlijke virussen in de laboratoria zijn de volgende:

1. vatbare dieren:

Bij deze techniek kan het te kweken virus groeien in het lichaam van een levend dier, zoals muis of cavia, dat gevoelig is voor dat virus. Deze techniek wordt niet langer gebruikt en is vervangen door de volgende meer recente, efficiënte en economische technieken.

2. Weefselcultuur:

Het is een zeer geavanceerde techniek. Hier worden dierlijke cellen waarvan bekend is dat ze vatbaar zijn voor het te cultiveren virus en waarvan ook bekend is dat ze zich snel vermenigvuldigen, eerst geïsoleerd uit geschikt levend weefsel van een dier. Deze cellen worden in een glazen of plastic vat geplaatst dat een extreem rijk voedingsmedium bevat. De cellen hechten zich vast aan het oppervlak van het vat en blijven delen totdat het gehele oppervlak bedekt is met een samenvloeiende monolaag cellen. Dit wordt weefselkweek genoemd.

Vervolgens wordt het te kweken virus geïnoculeerd in de gevoelige weefselkweek. Het virus infecteert de levende cellen van de weefselkweek, ondermijnt hun metabolische machinerie en repliceert snel, waardoor het overvloedig groeit in de cellen.

3. Embryonated Chick Eggs:

In deze eenvoudige en economische techniek wordt het te kweken virus geïnjecteerd in een geëmbryoneerd kippenei. Het virus groeit in het levende kippenei en veroorzaakt ziekte in het embryo, wat zich uit in verschillende ziekteverschijnselen (cytopathogene effecten) die specifiek zijn voor dat virus. Aanwezigheid van deze symptomen duidt op de groei van dat virus in het ei.

Vereiste materialen:

Twee geëmbryoneerde kippeneieren, schouwtoestel, tinctuurjodium, absorberend katoen, 70% alcohol, een kleine boor, 1: 2 verdunning van het Newcastle-virus, spuit, steriele vasper, steriele zoutoplossing, petrischalen, bunsenbrander, laminaire stroomkamer, schikpot incubator.

Procedure:

1. Twee geëmbryoneerde kuikeneieren worden geschouwd met behulp van een bril om de levensvatbaarheid van het embryo aan te tonen. Het embryo is levensvatbaar, als het beweging vertoont als reactie op warmte van licht. Ook worden de posities van de luchtzak en grote bloedvaten tijdens het schouwen bepaald en gemarkeerd op de eischaal (Figuur 8.7).

2. De schaal wordt gedesinfecteerd via de luchtzak met tinctuurjodium en vervolgens gedroogd. Dezelfde plaats wordt afgeveegd met absorberende katoen doordrenkt met 70% alcohol.

3. De punt van een kleine boor wordt gesteriliseerd door onderdompeling in 70% alcohol en dan vlammend.

4. Met behulp van deze boor wordt een klein gat aseptisch op de schaal boven de luchtzak gemaakt in een gebied weg van de bloedvaten.

5. 0, 2 ml van de 1: 2 verdunning van het Newcastle-virus wordt aseptisch geïnjecteerd in de allantoïsche holte van een van de twee eieren met behulp van een gesteriliseerde spuit. Dit wordt gedaan door het ei in een verticale positie te houden, door de naald van de spuit door het gat op de schaal te steken tot zijn gevest in een hoek van 45 °, door het membraan van de luchtzak te penetreren en in de allantoïsche holte te penetreren. Dit virus-geïnoculeerde ei dient als het 'testei'.

6. Na de inoculatie wordt de naald teruggetrokken en wordt het gat op de schaal afgesloten met een steriele hete vasper.

7. Onder toepassing van dezelfde techniek wordt 0, 2 ml steriele zoutoplossing geïnoculeerd in het andere geëmbryoneerde kippenei, dat dient als het "controle-ei".

8. Beide eieren worden gedurende 3 tot 4 dagen bij 37 ° C geïncubeerd in een incubator met de juiste vochtigheid.

9. De observaties worden elke dag genoteerd.

10. Nadat de dood is vastgesteld, wordt het embryo uit zijn omhulsel losgemaakt en de inhoud in een petrischaal gegoten en opnieuw waargenomen.

11. Alle verontreinigde materialen worden weggegooid in een beker met bleekpoeder.

opmerkingen:

1. De eieren worden elke dag gegluurd tijdens incubatie en geobserveerd op embryonale dood zoals blijkt uit stopzetting van beweging, die gewoonlijk 3 tot 4 dagen na inoculatie van het virus optreedt.

2. Zodra de dood is vastgesteld, wordt het embryo uit zijn omhulsel losgemaakt en de inhoud in een petrischaal gegoten. Het wordt waargenomen voor necrotische laesies en tekenen van bloeding.

3. Het controle-ei wordt onderzocht op tekenen van cytopathogene effecten.

4. De waarnemingen zijn vastgelegd in tabel 8.2.