Coagulase-test op bacteriën om hun vermogen tot coaguleren van bloed te achterhalen (met figuur)

Coagulase Test op bacteriën om hun vermogen om bloed te coaguleren te achterhalen (met figuur)!

Beginsel:

De pathogene stammen van de bacterie Staphylococcus bevatten het enzym coagulase, dat werkzaam is in, gastheerweefsels om fibrinogeen in fibrine om te zetten.

Het fibrine-netwerk dat wordt gevormd, omringt de bacteriecellen of de geïnfecteerde weefsels en beschermt de bacteriën tegen niet-specifieke mechanismen voor gastheerresistentie, zoals fagocytose en de anti-stafylokokkenactiviteit van normaal serum.

Dit enzym helpt ook bij de coagulatie van bloed in de gastheer door een voorloper te zijn van de trombineachtige substantie, die bloed stolt of stolt. De coagulase-test wordt uitgevoerd om onderscheid te maken tussen coagulase-positieve (pathogene of virulente) en coagulase-negatieve (niet-pathogene of avirulente) Staphylococcus.

In de coagulase-test wordt een suspensie van de testspecies van Staphylococcus gemengd met bloedplasma en het geïnoculeerde plasma wordt vervolgens periodiek onderzocht op fibrinevorming of coagulatie.

Stolselvorming binnen vier uur wordt geïnterpreteerd als een positief resultaat en indicatief voor een virulente (pathogene) stam van Staphylococcus. De afwezigheid van coagulatie na 24 uur incubatie is een negatief resultaat, indicatief voor een virulente (niet-pathogene) stam.

Vereiste materialen:

Laboratoriumdier (konijn of cavia), spuit, anticoagulans (natriumcitraat of heparine), bloedafnamebuisjes, centrifuge, reageerbuisjes, objectglaasje, entdraad, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerppot, geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën van het geslacht Staphylococcus.

Procedure:

1. De spuit en de bloedafnamebuisjes worden gewassen met een oplossing van natriumcitraat of heparine, om bloedstolling onmiddellijk na verzameling te voorkomen (figuur 7.24).

2. Met behulp van de spuit wordt bloed van proefdieren zoals konijnen of cavia's verzameld en in de verzamelbuizen gedaan.

3. Het bloed wordt gedurende 15 minuten bij 3000 tpm in een centrifuge gecentrifugeerd.

4. Het supernatant (plasma) wordt verzameld in een andere gecitrateerde reageerbuis en het residu (bloedcellen) weggegooid.

(a) Slide-methode:

1. Twee druppels van een suspensie van de testbacteriën die behoren tot het geslacht Staphylococcus, worden op twee gelijk verdeelde helften van een glaasje geplaatst met behulp van een entcirkel. Eén druppel wordt gebruikt als 'controle' om te zien of de bacteriën zelf in klonten zitten en de andere druppel wordt gebruikt als 'test'.

2. Aan de 'testdruppel' wordt een druppel verzameld plasma toegevoegd, gemengd en bij kamertemperatuur geïncubeerd.

3. De druppels worden waargenomen met tussenpozen van uur tot 4 uur.

(b) Tube-methode:

1. Twee kleine reageerbuizen worden genomen. Eén reageerbuis is gemarkeerd met 'test' en de andere 'controle'. In elke reageerbuis wordt 0, 5 ml van de bacteriële suspensie genomen.

2. Aan de 'test' buis wordt 1 ml plasma toegevoegd, gemengd en geïncubeerd

3. De buizen worden waargenomen met tussenpozen van uur tot 4 uur.